Nel caso in cui la tecnica applicata preveda l’asportazione di pezzi bioptici vari, questi vengono raccolti in piastre Petri 35x10mm Falcon contenenti 2 ml di Quinn’s Advantage Protein Plus Fertilization Medium termostatato a 37° per 24 ore. Le piastre vengono contrassegnate, anche in questo caso, con la provenienza del prelievo bioptico e passate in laboratorio.
Il contenuto di ciascuna piastra deve essere registrato.
Facendo uso di vetrini portaoggetti sterili il prelievo viene accuratamente strisciato e sminuzzato in modo da recuperare il maggior numero di spermatozoi contenuti all’ interno dei tubuli seminiferi e adesi ad essi.
Alla fine della seguente procedura, che può avvalersi anche dell’ ausilio di pinzette sterili o aghi di siringhe da insulina, si deve ottenere un preparato omogeneo.
Metodo di trattamento del materiale recuperato
Si prelevano 10 microlitri di sospensione e si allestisce un vetrino a fresco, si osservano 100 campi all’invertoscopio con ingrandimento 20X, si determina la presenza di spermatozoi e la percentuale di forme mobili. I dati raccolti devono essere accuratamente registrati.
Si procede quindi a lavaggio del campione:
- tutta la sospensione viene trasferita in una provetta PROVETTA 15 ML 17X120 MM ST Falcon 352095
- Si centrifuga per 10′ a 1800 g, si rimuove il sovranatante e si risospende il pellet.
- Nel caso in cui si proceda alla ICSI, si risospende il pellet in 50 microlitri di terreno tamponato messo in incubatore 37°C per 12h e si allestisce la piastra.
- Nel caso in cui non si effettui la ICSI lo stesso giorno del prelievo, il pellet si risospende con circa 500 microlitri di terreno tamponato termostatato a 37°C per 12 h, e il campione seguirà la procedura di crioconservazione